COVID-19 研究支援

SARS-CoV-2構成物 - CARBOSYNTH (英国)

 ・ メインプロテアーゼ
 ・ メインプロテアーゼ阻害剤
 ・ 核タンパク質
 ・ スパイク糖タンパク質
 ・ 小分子

SARS-CoV-2に対する抗体判定精度管理血清 - TECHNOPATH (アイルランド)

 ・ IgGポジティブコントロール
 ・ IgMポジティブコントロール
 ・ IgG・IgMネガティブコントロール

COVID-19治療薬開発支援 API・類縁物質・標識化合物など - Clearsynth (インド)

【治療候補薬例】
 ・ レムデシベル
 ・ イベルメクチン
 ・ デキサメタゾン
 ・ ファビピラビル (アビガン)
 ・ トシリズマブ
 ・ バリシチニブ
 ・ その他 候補薬多数

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SARS-CoV-2構成物 - CARBOSYNTH (英国)

Main Protease from SARS-CoV-2 Assay Toolkit - メインプロテアーゼ -

 SARS-CoV-2 ウイルスは、2020 年に世界的な緊急事態を引き起こしております。感染予防・COVID-19疾患治療・診断目的に対し、ウイルスを検出するための効果的なアプローチを設計するために、ウイル スの生態を理解することが重要かつ緊急に必要とされています。

Coronavirus proteases

 SARS-CoV-2 ゲノムは、ポリペプチド pp1a および pp1ab をコードしており、これらは 14 箇所でウイルスプロテアーゼ Mpro および PLpro によって切断され、非構造タンパク質（nsps）と呼ばれる 16 個の ウイルスタンパク質を生成する（Ullrich and Nitsche, 2020）。

The main protease（M^pro/3-CL^pro）

 プロテアーゼ（エンドペプチダーゼ）Mproは、SARS-CoV-2 の重要な酵素であり、ウイルスの複製と転写に必要とされています。M^proはウイルスのポリタンパク質を 11 の保存された切断部位で切断し、ウ イルスのライフサイクルに必要なタンパク質を放出します。これらのうち、M^pro は、ウイルス複製に必要な 3 つの重要なタンパク質、すなわち、自身、RNA 依存性 RNA ポリメラーゼ（RdRp、nsp12）、ヘ リカーゼ（nsp13）を放出する。

 メインプロテアーゼ（M^pro）は、Leu-Gln-(Ser, Ala, Gly)モチーフを含む認識配列のグルタミン残基のC末端でウイルスポリプロテインを切断する（Rut et al, 2020）。SARS-CoV-2 Mproは、ヒトにおいて近縁 ホモログを持たないため、魅力的な薬物標的を表す（Ullrich and Nitsche,2020）。

Mproの要約
・ キモトリプシン様システインプロテアーゼ
・ タンパク質分解活性にはホモ二量化が必要
・ Mpro モノマーの分子量は 33.8kDa
・ グルタミン残基の後のみを切断
・ 11 の異なる部位でポリタンパク質を切断
・ 別名: 3CLpro, nsp5

Biosynth Carbosynth から入手可能な SARS-CoV-2 メインプロテアーゼは、C 末端に6xHis タグを有する組換えタンパク質としてE.coliで発現されたが、これはPreScissionプロテアーゼで除去することが できる。

Fluorogenic substrate for M^pro

SARS-CoV-2 Mpro の酵素活性を検出するための基質は、蛍光化合物 AcAbu-Tle-Leu-Gln-AMC である。蛍光物質 7-アミノ-4-メチルクマリン（AMC）は、グルタミン残基のC末端でペプチド結合を介してテトラペプチドに結合しています。Mpro の加水分解活性に続いて、蛍光性 AMC 基は基質から放出され、蛍光シグナル（Ex　380 nm / Em 455 nm）を生成します。

図 3. Mpro (50 μg/mL, 30 min, 37°C)を含まない(A)及び含む(B)アッセイバッファー中の 0.1 mM Ac-Abu-Tle-Leu-Gln-AMC を含有するガラス管のイメージ。
イメージは、黒背景に紫外線 366nm、露光時間 1000ms で撮影した。


 SARS-CoV-2 メインプロテアーゼ（濃度範囲 4.7〜37.5μg/mL）を、0.1mM の蛍光基質 Ac-Abu-Tle-LeuAMC を含む pH7.3 のアッセイバッファーに添加した。アッセイは、0.2 mL のアッセイ容量の黒 96 ウ ェルプレートで行った。蛍光は、SpectraMax M5 プレートリーダー（Molecular Devices）を用いて、最も低い PMT 増幅度で 10 分間追跡した。蛍光のタイムコース（相対蛍光単位、RFU）を図 5 に示す。

取扱商品

Enzyme:
 ・ SARS-CoV-2 main protease
  - Recombinant SARS-CoV-2 M^pro protease with 6xHis tag at C-terminal. Purified from E.coli
Substrate:
 ・ Ac-Abu-Tle-Leu-Gln-AMC
  - Fluorogenic substrate for Mpro protease. Ex 380 nm / Em 455 nm.
Buffer:
 ・ TRIS - Buffer
 ・ EDTA - Chelating agent
 ・ DTT - Reducing agent

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Inhibitors of the main protease from SARS-CoV-2 - メインプロテアーゼ阻害剤 -

SARS-CoV-2 由来のメインプロテアーゼ阻害剤

 SARS-CoV-2 プロテアーゼのいくつかの阻害剤が、計算と実験のアプローチを用いて明らかにされている。以下では、SARS-CoV-2 プロテアーゼに対する既知の IC50 および EC50 値と同様に、in vitro で試 験された阻害剤について纏めております。

取扱商品

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Structural Proteins - 核タンパク質・スパイク糖タンパク質 -

 SARS-CoV-2 ウイルス粒子は、スパイク糖タンパク質（S）、膜タンパク質（M）、核カプシドタンパク質（N）、エンベロープタンパク質（E）の 4 つの構造タンパク質から構成されています。
 4 つのタンパク質はすべてウイルスのライフサイクルに不可欠なものですが、スパイク糖タンパク質はウイルスが宿主細胞に付着し、侵入するのを可能にする役割を担っています。
 この三量体タンパク質は宿主の ACE2 受容体に結合し、2 つの膜の融合を促進します。したがって、スパイク糖タンパク質は、緊急に必要とされるワクチン、抗体、診断のための重要なター ゲットであると考えられています。
図. SARS-CoV-2 ウイルスの宿主細胞への感染の初期段階を示す。ウイルス表面のスパイク糖タンパク質は、宿主細胞膜の ACE2タンパク質と相互作用し、エンドサイトーシスや細胞内へのウイルスの侵入につながる下流のカスケードを引き起こす。

取扱商品

Code	Product
BS178975	SARS-CoV-2 Spike glycoprotein trimeric ectodomain - from mammalian HEK293 cells
BS178976	SARS-CoV-2 Spike glycoprotein trimeric ectodomain - from mammalian CHO cells, frozen
BS178977	SARS-CoV-2 Spike glycoprotein trimeric ectodomain - from mamm
BS178978	SARS-CoV-2 nucleoprotein - from S. cerevisiae, frozen

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Small molecules - 小分子 -

 以下の製品は COVID-19 の研究に関連するもので、SARS-CoV-2 やその近縁ウイルスに関連して引用されています。製品は 5 つのセクションに分けられています。
 ・ 宿主細胞へのウイルスの侵入
 ・ ウイルス RNA の転写と複製
 ・ ウイルスの集合と成熟
 ・ 免疫応答変調
 ・ その他
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